引言

人类冠状病毒229E（Human Coronavirus 229E, HCoV-229E）是已知的七种人类冠状病毒之一，通常引起轻度呼吸道感染，但在免疫缺陷人群或老年患者中可能导致严重肺炎。为研究其致病机制、药物筛选及疫苗开发，建立合适的动物模型至关重要。近年来，通过基因修饰或病毒适应性传代，HCoV-229E感染小鼠肺炎模型逐渐成为研究热点。本文旨在系统介绍该模型的构建方法、检测范围、检测项目、检测方法及仪器，为相关研究提供参考。

HCoV-229E感染小鼠肺炎模型的构建

HCoV-229E天然宿主为人类，其感染依赖于细胞表面的氨基肽酶N（APN）受体。由于小鼠APN受体与人类存在差异，直接感染野生型小鼠效率较低。目前主要通过两种策略建立模型：（1）使用转基因小鼠（如hAPN-KI小鼠），使其表达人类APN受体；（2）通过适应性传代筛选出能够感染普通小鼠的病毒变异株。感染途径通常为鼻内接种，模拟自然感染过程，感染后3-5天可观察到肺部炎症及病毒复制峰值。

检测范围

该模型的检测范围涵盖病毒学、病理学及免疫学多个层面，主要包括：

• 病毒载量检测：肺组织、鼻腔灌洗液中的病毒滴度；
• 病理变化：肺泡损伤、炎性细胞浸润及肺水肿程度；
• 免疫应答分析：先天免疫（如干扰素水平）和适应性免疫（如T细胞亚群）反应；
• 临床症状评估：体重变化、活动状态及呼吸频率监测。

检测项目与方法

1. 病毒学检测

• 病毒滴度定量：采用空斑形成试验（Plaque Assay）或RT-qPCR检测肺组织中病毒RNA拷贝数；
• 病毒抗原定位：免疫组织化学（IHC）或免疫荧光法（IFA）观察病毒在肺组织中的分布。

2. 病理学检测

• 组织病理评分：通过HE染色评估肺泡间隔增厚、炎性细胞浸润及出血情况，采用半定量评分系统（0-4分）；
• 肺水肿指数：计算肺湿重与干重比值，评估肺组织液体渗出程度。

3. 免疫学检测

• 细胞因子检测：ELISA或多重液相芯片技术（Luminex）测定IL-6、TNF-α等炎症因子水平；
• 免疫细胞分析：流式细胞术（FCM）检测CD4+/CD8+ T细胞、巨噬细胞及中性粒细胞比例。

检测仪器与设备

• 实时荧光定量PCR仪（如ABI 7500）：用于病毒RNA定量及宿主基因表达分析；
• 病理切片扫描系统（如Leica Aperio）：实现HE及免疫组化切片的全景数字化分析；
• 流式细胞仪（如BD FACS Canto II）：高通量分析免疫细胞表型及功能；
• 生物安全柜（Class II A2型）：确保病毒操作符合生物安全标准。

结论

HCoV-229E感染小鼠肺炎模型为研究冠状病毒的发病机制及干预策略提供了重要工具。通过综合病毒学、病理学及免疫学检测，可全面评估病毒感染动态、宿主反应及药物疗效。未来研究需进一步优化模型构建效率，并开发高灵敏度检测技术，以推动抗病毒药物与疫苗的临床转化。

了解中析

实验室仪器

合作客户